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サンゴと蛍光タンパク質

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蛍光タンパク質

画像は発光する蛍光タンパク質、Tsien Laboratoryより

以前ご紹介したエダコモンのオレンジポリプ発現個体以来、蛍光色素について色々と調べていました。今回はそれをちょこっとメモ程度にまとめてみます。

まず、僕は今までサンゴの蛍光色を、ただ漠然と「蛍光色素」と表現してましたが、その方面?での用語の使い分けに際し、蛍光物質には「蛍光色素」や「蛍光タンパク質」があり、どうやらサンゴのそれは蛍光タンパク質と言い表すのが適切であるようです。

で、それらを大まかに区別すると、およそこんな感じのようです。

蛍光 蛍光色素 蛍光タンパク質
成分 化学合成 生物由来
特徴 低分子 蛍光強度が高い
用途 細胞や染色体などを染色 遺伝子工学によるタンパク質の追跡

まず、蛍光色素には非常に多くのバリエーションがあります。
以下の資料は参考程度にご覧下さい。

一方、生物由来である蛍光タンパク質には、我々も非常に関心の高いサンゴ由来の蛍光タンパク質がいくつか抽出・生成されています。

  • Fluorescent Proteins (PDF)
    ミドリイシ・シアン
    ウミキノコ・グリーン
    アザミ・グリーン
    クサビラ・オレンジ
    桂馬/Keima570(赤)(コモンサンゴ)
    ドロンパ/Dronpa・グリーン(キッカサンゴ)
    カエデ/Kaede(緑・赤)(ヒユサンゴ)
    その他…
  • Living Colors Fluorescent Proteins (PDF)
    RCFP (reef coral fluorescent proteins/造礁サンゴ由来蛍光タンパク質)
    シアン(AmCyan1)
    緑(ZsGreen1)
    黄(ZsYellow1)
    赤(DsRed-Monomer、DsRed2、DsRedExpress)
    深赤(AsRed2、HcRed1)
  • Keima-Red
    mKeima 440nm-620nm
    dKeima 440nm-616nm
    dKeima570 440nm-570nm

厳密な励起波長・発光波長は別としても、多くは普段から僕らも観察し見慣れているサンゴの蛍光色ですね。

各サンゴの蛍光色

各蛍光タンパク質の紹介はここまで。各々の特徴・詳細については割愛します。
興味があれば必要に応じて検索してみてください。

そして、肝心の蛍光タンパク質の働きについて、有用な情報もひとつご紹介します。

刺胞動物と蛍光タンパク質 (PDF)

以下、引用。

採集した蛍光性サンゴと非蛍光性サンゴに強い紫外光を照射すると、後者においてより顕著に光合成阻害が認められた。
-
この結果から、蛍光タンパク質が褐虫藻を強い日光から保護することが示唆された。
-
実際、1998年に大堡礁で起こったサンゴの大規模な白化現象においてサンプリングしたものを調査したところ、蛍光タンパク質を発現する個体ほど白化しない傾向が確かめられている(Salihetal.2000)。

確かに蛍光色の励起は、青を吸収しての緑・赤励起、そして紫外線を吸収しての青・シアン励起などがあり、その意味では有害な紫外線を安全な可視光線にシフトしていると言う点で、対紫外線機能のひとつとも言えます。これは昔からよく言われる対紫外線色素のMAAsとはまた別の反応です。

例えば、浅場のミドリイシとして有名なスギノキミドリイシの特にブルー個体に於いては、この蛍光タンパク質によって積極的に紫外線を青色やシアンへシフトしていることが判ります。逆に言えば、どうして浅場のスギノキが青いのか、その裏づけとも言えるでしょう。

実際にブルーのスギノキや他の蛍光サンゴに青色や近紫外線の光を当てて、それぞれの蛍光タンパク質がどのような蛍光反応を示すか、我が家の個体で試してみました。

各サンゴの波長ごとの蛍光反応

仮に、グリーンのエダコモンの蛍光タンパク質をGFP(Green Fluorescent Protein)、オレンジのエダコモンの蛍光タンパク質をRFP(Red Fluorescent Protein)、スギノキの蛍光タンパク質をCFP(Cyan Fluorescent Protein)としますと、GFPやRFPは青色~シアンの光でもっとも強く反応(吸収極大)し、スギノキのCFPは近紫外線の400nmが吸収極大であることが判ります。

また、スギノキの蛍光タンパク質について更に詳しく観察してみました。

スギノキブルーの蛍光タンパク質の反応

最近気づいたのですが、このスギノキの場合、共肉は強いシアン蛍光ですが、実はポリプにも発光強度が弱いながらも蛍光発光があることが判りました。UV 400nmを当てると、ポリプが薄っすらとロイヤルブルー(あるいはブルー)を帯びているのです。
でも写真にはうまく写らない。。。判るかなぁ?
でも発光量が弱すぎて初老の老眼にはチト確認が辛い。。。気のせいだったりして(汗)

このことからも、スギノキブルーには適度な紫外線を当てるべきだと言えるでしょう。
そうでなければ、自然光下で見られる本来の濃ゆいブルーが発現できないと思われます。
これまでのようなメタハラや蛍光灯の環境では意識せずとも含まれていた紫外線も、オールLEDの水槽では意図的に入れる必要性が生じますので、可能であればUV入りLEDランプを併用することが理想的です。
ただ、ご使用のランプの中に一般白色LEDが混じっているならば、幸い蛍光体による励起波長範囲に僅かな近紫外線域が含まれますから、スギノキブルーの青みもそれなりに出ると思います。でもフルブーストを掛けるなら是非UV入りを入れたいところです。
尚、RGB白色LEDの場合は蛍光体励起が無い分、近紫外線は一切含まれていないため、青蛍光やシアン蛍光は得られず、単なる青光成分による演色効果でしか青みは得られません。この場合、UV入りランプは必須となるでしょう。

さて、今回自分なりに時間を掛けて蛍光タンパク質について調べてみたつもりでしたが、それで蛍光グリーンのエダコモンサンゴのポリプに蛍光オレンジが乗った原因が判ったのか?と言うと、それが結局さっぱり判りませんでした♪
人為的に蛍光タンパク質の発光色・強度を改変する場合、その蛍光タンパク質の遺伝子クローニングののち、DNAのアミノ酸配列を組み替えることで実現するそうですが、そういう変化が自然下でも起こるのか、それとも単に異なる蛍光タンパク質を獲得したのか、と考えると、やっぱり後者の方が自然の成り行きかな?
でも、当時は蛍光オレンジなんて水槽のどこにも無かったんだけどなぁ。。。
実は蛍光タンパク質は細菌の如くどこにでも存在するモノなのか!?
そういえばサンゴのプラヌラ幼生も、最初は持ってないはずの褐虫藻をいつのまにか取り込んでるようだし。。。
ただ、ひとつ気になるのは、このようなエダコモンの現象は今までに一度も見たことがなく、今回LED環境で飼育してみて初めて遭遇した現象だと言えること。まさかLEDの破壊的な光線により遺伝子が組み替えられた!?・・・なんてことはないよね(笑)

と言うわけで、答えは先送りです。

尚、念のため補足しますが、サンゴの色彩を決定づけるのは蛍光タンパク質だけではありません。褐虫藻自体の色、密度、そしてクロロフィルやカロテノイド、フィコビリンのような光合成色素など、さまざまな要因により見た目の色彩が形成されていると思われます。

その他の参考関連情報

その他、間違い等あればご指摘頂けると助かります。

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サンゴ成長記録:2011/02

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LED実験メインの苛酷な水槽環境にも負げず、スクスクと育つサンゴの定期報告便です。

エダコモン・グリーン(沖縄くん)

エダコモン・グリーン

里帰りしたのは2009年末でしたが、まともに伸び始めたのは土台に接着してからかな。
そして、エリジオン閃光II スーパーブルーでメタリックグリーンに焼き上げました♪

エダコモン・グリーン、一時オレンジポリプ(沖縄くんの欠片)

エダコモン・グリーン2

太陽光LEDシステム照明が完成して以来、どこへ避難させても光が強すぎて、せっかくポリプに載っていた蛍光オレンジは完全に消失したようです。うーん。。。残念。
それにしても最近はもう土台に共肉の這う余地が無くなってきてヤバいです。。。汗

エダコモン・オレンジ(fromやどかり屋)

エダコモン・オレンジ

このオレンジ個体は、あまり何も考えなくても上手にオレンジが維持されています。
と言うのも、この蛍光オレンジの吸収帯域は、下はロイヤルブルーから上はシアンまでと有効波長域が広範囲に渡る為、LED照明環境下でさえ波長不足の恐れはまず無いだろうと思われるからです。極端に言えば、それなりの照度さえあれば電球でも飼える?(笑)

エダコモン・ピンク(fromやどかり屋)

エダコモン・ピンク

改めて紹介するのは初めて?かな?
かのハギコモン(byハギやん発祥)です。
今まではずっとエリジオン閃光II スーパーブルーとLeDio 9 DeepUV3を当てていて、それなりにポリプはピンクを維持できていましたが、先日から試しに太陽光LED直下に位置替えをしてみました。さて、どうなるかしら。。。

エダコモン・パープル(fromやどかり屋)

エダコモン・パープル

これも紹介は初めてかな。パープル?かも知れない?として貰った個体ですが、実はよく判らない茶色です(汗)。いや、ただの茶色じゃなくて、濃い目のこげ茶色です。だから余計に青色の光を当てるとパープルっぽく見えるのかな? でも、一通りの色のLEDは当ててみましたが、励起される蛍光色は皆無でした。元は何色だったんだろう。。。?
で、今までは太陽光LED直下で粘ってましたが、一向に色素が光臨する気配が無いため、先日からハギコモンと入れ替えで真っ青環境に移動しました。すると、光が強すぎたか、こげ茶色があっという間に飛んで今は薄い茶色に。。。ま、UV量も増えたので、あとは紫蛍光か青蛍光が載ってくれたら嬉しいんだけど。。。乞うご期待?

これなにサンゴ?

なにこれ

実は、やどかり屋からエダコモンを貰った際に、枝の土台用に貰ったライブロック片が、実はなんかサンゴっぽかったので隔離しておいたら、やっぱり何かのサンゴだったみたいで、今では共肉も捲いてポリプも出るようになりました。でも名前が判りません。。。
ポリプの見た目はカーリーです(笑)

スギノキ・ブルー(from某Y氏)

スギノキ・ブルー

なんか、褐虫藻が少しずつ抜けてきているような、白化に向かっているような、そんな色の薄さ加減が目立ってきました。栄養塩が足らなすぎるのかなぁ。。。肥料いくか?

その他、白化に向かっていたケントパパミドリイシの生き残りは、先日遂に完全に白化し、その後徐々にポリプの出が悪くなり、一週間ほど前に遂に昇天されました。
せっかくあそこまで持ち直してたのになぁ。。。残念。ナムナム。。。

更に、スギノキと一緒に某Y氏から貰った1本の赤いミドリイシの枝が、2週間ほど前からポリプが出なくなり、数日前から遂にホロホロと共肉がほつれ始め、その後はあっという間に完全に溶けてしまいました。実はこちらは多分原因は光障害であると認識していました。照明全体の照度はスギノキに合わせていたので、耐えろ耐えろと念じてましたが、どうも耐えらんなかったようです。面目ない。こゆ時、水深の無い水槽は逃げ場がないなぁ。。。
某Y氏、すまぬぅ。。。

どうも最近、ZEOvitでもないのに褐虫藻が抜けて薄くなっていく傾向が目立ちます。なんでやねん。。。パステルは好きくないねん。。。ちょっと栄養塩とかミネラルとか光について、そろそろ真剣に考えないとアカンかな。。。

その他、一部の個体は実験のため知人宅のLED水槽に出向しております(笑)
なかなか順調とのことです。

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Phosphor light修正、UV大盛り

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先日topledlightから取り寄せた各UV素子をマクロで撮ってみました。

各UVチップ拡大

なにやらどのチップも個性的な線画のようです。何か意味があるのかな?
子供の頃に流行った迷路絵みたい。。。

それと、以前からなんで380nmだけ少し暗く感じるのかなぁ?と疑問でしたが、どうやらチップ自体が他の素子よりもやや小ぶりなので、きっとそれが関係しているのでしょう。

ところで、この紫外線LED素子を贅沢に使ったPhosphor lightを先日紹介しましたが、それを更に以下のように作り変えました。5日ほど前の話だけど。

Phosphor light新回路

RoyalBlueとBlueの出力は据え置きで、UVのみ前回の30mA駆動から一気に200mA駆動に引き上げました。何でかと言うと、30mAではあまりに出力が弱すぎて、蛍光の女神を召還できない気がしたから?
それと、前回の仕様は各素子×2ヶずつ搭載してましたが、どうせ微小ドライブだし勿体無いので、1ヶずつに変更しました。余った素子は随時テストで使います。

ビフォーアフター。

UV大盛りビフォーアフター

UVの出力を上げたので、スギノキブルーの青蛍光+シアン蛍光が強調されました。
画像は少し明るめに調整してますが、目視でもほぼこんな感じです。

で、5日ほど経過した訳ですが、今のところ特に変わりなし。多分。
ただ、最近は昼間よりも夜間の蛍光を観察する方が楽しくなったかも(汗)

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